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OPTICS FRONTIERS

09

2024

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电压成像新工具!中国科学院王凯团队开发了一种新型三维电压成像新技术,大幅度提高了电压成像的通量!

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电压成像直接测量神经元活动,有望理解单个神经元和群体之间的信息处理。然而,由于同时要求高成像速度和信噪比、大体积覆盖和低光漂白率,大神经元群上的成像电压一直是一个挑战。

2024年10月8日,中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心王凯团队在Nature Methods(IF=36)在线发表题为“Volumetric voltage imaging of neuronal populations in the mouse brain by confocal light-field microscopy”的研究论文,该研究开发了一种共聚焦光场显微镜,通过结合速度增强相机,快速和强大的扫描机制,激光散斑噪声消除和优化的光效,超越了传统的速度和噪声性能限制。

通过这种方法,该研究同时记录了小鼠皮质中直径为800µm、厚度为180µm的300多个峰值神经元,记录时间超过20分钟。通过整合空间和电压活动谱,研究人员绘制了清醒小鼠大脑的三维神经协调模式。该方法对于体积电压成像的常规应用具有鲁棒性。

光学成像可以无创地监测密集和大的神经元群体的活动,具有细胞类型特异性和广泛的分子灵敏度,通过各种功能指标实现。然而,光记录的时间分辨率往往受到指示物动力学和生理动力学的限制。电压成像,旨在准确报告神经元的膜电位,有可能保留光学记录的许多优点,同时打破其传统的速度限制。它为更好地理解神经回路中的信息处理提供了希望。尽管电压成像具有前景和优势,但由于对成像速度的要求比钙成像高一到两个数量级,电压成像面临挑战。

双光子显微镜可以穿透脑组织深处,并已在大型神经元群中证明了体积钙成像。然而,成像速度太慢,无法直接扩展到电压成像。为了提高成像速度和吞吐量,引入了双光子激发焦点的时空复用技术;然而,同步记录目前是在一个平面上实现的,与体积成像相比,限制了它们进一步提高吞吐量。双光子显微镜也优化了纵向电压成像,通过扩大体积减少光漂白。然而,由于其串行扫描方案,所需的高成像速度损害了可以同时记录的神经元数量。

为了提高成像吞吐量,已经开发了多平面共聚焦显微镜,可以同时在四个不同的平面上对密集标记的神经元进行成像。然而,其相对较小的视场(FOV)限制了可以同时记录的神经元数量。此外,尽管薄片显微镜已经发展到可以在斑马鱼大脑中进行高通量电压成像,但它并不适合在老鼠大脑中成像。尽管取得了这些进展,高通量记录小鼠大脑中体积神经元群的电压信号仍然是一个巨大的挑战,阻碍了它们在研究更大、更复杂的神经网络中的应用。

在这项工作中,作者开发了一种共聚焦光场显微镜,能够在400 Hz下成像直径为800 μ m、深度为180 μ m的体积,噪声性能接近理论极限。这使得Voltron能够同时对小鼠初级视觉皮层的大约1000个神经元进行电压成像。在这个成像的群体中,超过300个神经元表现出足够的信噪比来记录它们的峰值活动。这些神经元中约有三分之一对视觉刺激有反应,表现出典型的定向和方向选择性,表明在群体水平上成功地光学记录了感觉诱发的尖峰。这种高通量体积电压成像持续数十分钟。它可以分析3D分布的神经元群体之间的快速时间协调,并确定正相关和负相关神经元群体的不同空间模式。总的来说,共聚焦光场显微镜代表了一个有价值的进步,在满足更大的神经元群和3D体积内对体内电压记录日益增长的需求。

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